Transzpozon technológiák alkalmazása gén- és sejtalapú terápiában

Vezető: 
Dr. Ivics Zoltán, Dr. Izsvák Zsuzsa

 

Elért eredmények:
 
Bizonyos kerdesek megvalaszolasahoz a patkany, mint allatmodel alkalmasabb az egernel. Ilyen teruletek pl. a kardiovaszkularis kutatas, illetve a viselkedes tudomany. Ezenkivul fontos szempont az is, hogy a gyogyszergyarak altalaban patkanyokat hasznalnak gyogyszer tesztelesre. A kutatasokat azonban hatraltatta, hogy a homolog rekombinacion alapulo genom manipulacios technologia egyenlore csak eger modelben mukodik. Igy a fiziologias kutatasok eredmenyeit nehez genetikailag ertelmezni patkanyban. Nemregiben kozoltunk egy ujonnan kifejlesztett technologiat, amely kepes KO patkanyok eleoallitasara. Ebben az uj megkozelitesben a spermatogonialis ossejt es a transzpozonon alapulo mutagenezis technikat otvoztuk. A modszerrel tobb, mint 100 KO torzset sikerult eloallitanunk. A technika random gen csapda modszert hasznal, igy a mutagenezis nem iranyitott, hanem random. Elony viszont a modszer egyszerusege, illetve az a teny, hogy a mutagenezist sejt kulturaban lehet vegzni es nincs szukseg embrio maniplulaciora. A kovetkezo kihivas a modszer minen egyes lepesenek optimizalasa a Debreceni korulmenyek kozott, illetve a modszer folhasznalasa egy genetikailag fontos genetikai lokusz folterkepezesere - Qunatitative trati loci (QTL).
 
További tervek:
 
1. A tervezett kiserletek a kovetkezok:

(1) mutagenezis of patkany spermatogonial ossejtekben;

(2) Az eltalalt gen azonositasa;

(3) Az ossejtek transzplantacioja steril alany tesztiszebe;

(4) A KO koloniak fagyasztasos tarolasanak kidolgozasa;

(5) KO konyvtar letrehozasa;

(6) A kivant KO allat letrehozasa;

(7) A KO torzs fenotipizalasa;

 
2. Transzpozonon alapulo genom manipulacios technikak alapitasa (eger, patkany) A transzpozonon alapulo transzgenikus modszer tovabbfejlesztese. A transzpozonok kivalo gen transzfer vektorokka fejleszthetok. Tervunk az indukalhato knock-down technikak kifejlesztese (shRNA, miRNA). 
 
3. Nem viralis, genterapias megkozelites a chronic granulomatous disease (CGD), illetve a Wiskott-Aldrich szindroma kezelesere.
Ebben a projectben a cel a klinikai ertelemben relevans, nem viralis modszer kifejlesztese a kronikus granulomatous disease (CGD), illetve a Wiskott-Aldrich szindroma terapiajrara. Az utobbi idoben hatekony, nem viralis, transzpozonon alapulo genbeviteli modszert dolgoztunk ki, amely alkalmas ossejtek genetikai modositasara. Az altalunk kidolgoziott vektor tehnologiai attores es valodi alternetivaja lehet a komoly mellekhatasokkal jaro virus-alapu vektoroknak. (Breakthrough of the Year - ESGCT, 2009 Nov. Hannover; Award of the Molecule of the Year, 2009). A project pre-klinikai kiserletekre epul azzal a cellal, hogy pozitiv eredmenyek eseten, 2-3 even belul klinikai kiprobalas tortenhet. Az ex vivo kezelt ossejtek, illetve a model allatokbol nyert iPS (indukalt pluripotens sejtek) visszakerulnek modell allatokba. Ebben a kutatasi szakaszban a modszer hatekonysagat es biztonsagossagat teszetjuk.